12月30日,受山东省科技厅委托,山东省教育厅组织有关专家对青岛农业大学王宝维教授主持完成的山东省农业良种产业化项目“山东省家禽良种IGF-I基因的克隆和多态性分析研究”进行了验收和鉴定。验收专家组认为,项目超额完成了计划合同规定的各项任务指标,一致同意通过验收。鉴定委员会听取了课题组的工作报告和技术报告,审查了相关资料,经过质询讨论,一致认为该项目总体研究达到国际先进水平。副校长宋希云出席了验收鉴定会。
IGF-Ⅰ基因是一种多功能细胞调控因子,其生物学功能主要是调节细胞代谢,促进细胞生长、分化和分裂,促进骨骼生长,还可通过内分泌、自分泌、旁分泌等多种方式发挥作用,调节成骨细胞功能、参与骨重建。此外,IGF-Ⅰ在动物出生后的生长发育中起重要作用;对胃肠及胰腺发育、代谢调控及维持神经系统的正常功能等方面也有着十分重要作用。
在多年的研究中,王宝维教授认为,充分挖掘地方家禽品种优良基因,分析其与经济现状的关系,对实施分子辅助标记选择具有重要的意义。
王宝维教授带领课题组通过对我省地方特色品种五龙鹅、地方优良品种琅琊鸡和地方保护品种鲁西斗鸡的IGF-Ⅰ基因的克隆和多态性分析,探讨了基因多态性位点对经济性状和体型外貌的关系,为分子标记辅助选择提供了依据,以便将传统育种技术与分子遗传标记手段相结合,加快地方家禽品种的育种进展和创新种质资源。
“山东省家禽良种IGF-I基因的克隆和多态性分析研究”项目首次克隆了562bp的五龙鹅IGF-Ⅰ基因cDNA部分序列和5’-UTR部分序列796bp。克隆了表达IGF-Ⅰ基因成熟蛋白的序列IGF-Ⅰm 228bp,与pET-32a载体连接构建重组质粒pET-IGF-Ⅰm,经1.0mM IPTG在25℃的条件下诱导4h,目的基因表达量较高。SDS-PAGE和Western 印迹显示表达产物分子量约为28KD。确定了五龙鹅IGF-Ⅰ基因在各组织中表达量。项目克隆了琅琊鸡IGF-Ⅰ基因5′非编码区部分序列621bp,运用PCR-RFLP法检测了琅琊鸡该序列的多态性,扩增产物经PstⅠ酶后,出现AA、AB和BB三种基因型,其基因型频率分别是36.88%、49.65%、13.48%;研究表明,AA基因型对肉用性能相关的生化指标有正向效应,AB基因型对蛋用性能相关的生化指标存在正向效应;AA基因型对琅琊鸡的肌肉产量和品质有正向效应。项目开展鲁西斗鸡IGF-Ⅰ基因的5′端调控区进行遗传多态性研究,并探讨其基因型与体型指标的相关性。 将扩增产物进行PstⅠ酶切后出现AA、AB和BB 3种基因型。研究表明,鲁西斗鸡 IGF-Ⅰ基因的“B”等位基因与体重、胸宽、胸骨长和胫长指数相关,适合向肉用方向选育;“A”等位基因与颈长和腿长相关,适合向斗性强的方向选育,为鲁西斗鸡的分化选育提供了理论依据。项目在国内外期刊上发表学术论文7篇,完成硕士研究论文2篇,在Genbank登录基因 4个;获山东省首届“研究生论坛”一等奖1项。专家认为,该项目总体研究达到国际先进水平。建议进一步开展IGF-Ⅰ基因在鲁西斗鸡选育中的应用。