枣树是我国的特有树种，鸡心枣是河南枣区的一个名优品种，鸡心枣品质优良，适宜鲜食、制干和加工。枣树常年靠根蘖繁殖，造成枣疯病传播，枣疯病是我国枣树上的毁灭性病害，多数感病品种幼苗当年即枯死，幼树1～2年死亡，成年结果树枣果逐年下降，病枝上开出变态花器，不结果，或结不成熟的畸形果，完全失去食用价值，最终造成果树死亡。要解决这一问题，可通过培育热处理与微茎尖结合培养脱毒枣苗，并采用组培方法进行快速繁殖。下面就工厂化生产脱毒鸡心枣进行介绍。
1 材料与方法
选用河南省新郑枣科所特优品种鸡心枣为试材，一年生根蘖苗定植于温室内，第二年2～4月份取其萌发的枣头芽，用稀释的洗洁精浸泡15分钟，再以自来水冲净后，置于超净工作台上，用70%的酒精消毒45秒，无菌水冲洗一遍，再用0.1%升汞消毒7分钟，无菌水冲洗4～5遍，在体视境下一一剥去叶片至0.5～0.1cm时接种于培养基上，接种后置于光强2500lx，温度27～29℃培养室内培养，光照时间14小时/天。诱导出的试管苗在38℃光照培养箱内热处理60天，热将处理的试管苗在无菌条件下剥取0.1～0.3mm的茎尖，在启动培养基中培养出试管苗，把茎尖试管苗送到中国林业科学院森保所病鉴室，经病毒检测完全脱除枣疯病，然后进行组织培养快速繁殖，夏、秋、冬季进行培养室内组培快繁，翌年3月上旬开始生根，4月份开始室外温室大棚内炼苗、移栽，6月份实施营养钵栽培或大田栽培。为降低成本，配置培养基时用白砂糖代替蔗糖，用自来水代替去离子水。
2 结果与讨论
2.1 启动培养基 选用同一种培养基与四种激素组合：（1）MS＋6～BA3.0mg/L＋NAA0.1mg/L；（2）MS＋6～BA5.0mg/L＋NAA0.3mg/L；（3）MS＋6～BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L；（4）MS＋6～BA1.0mg/L＋NAA0.5mg/L。结果表明，第三种配方最佳，接种到这种培养基上的外植体，3周后开始生长、分化并长成一棵苗，40天后可以切段增殖培养。
2.2 热处理微茎尖脱毒 经初代培养的试管苗在培养箱内温度从30℃逐渐升高到38℃，开始计时，热处理60天，中间换一次培养基。茎尖培养苗经PCR扩增方法检测脱除枣疯病类菌质体。
2.3 继代增殖培养基 选用三种激素组合：（1）MS＋6～BA1.0mg/L＋IBA0.5mg/L；（2）MS＋6BA1.5mg/L＋IBA0.5mg/L；（3）MS＋6～BA2.0mg/L＋IBA0.5mg/L。结果表明，第二种培养基及激素组合最佳，转接带叶茎段1.5cm长，1个月可增殖4.5倍左右，幼苗生长健壮。
2.4 生根试验 共用四种组合：（1）1/2MS＋IBA0.3mg/L＋NAA0.3mg/L；（2）1/2MS＋IBA0.5；（3）1/2MS＋IBA1.0mg/L＋NAA0.3mg/L；（4）1/2MS＋IBA1.5mg/L＋NAA0.5mg/L。结果表明，第四种培养基发根早，生根率达到100%，每株根数3条以上，平生根长2cm以上。
2.5 试管苗驯化移栽 枣树苗喜欢高温强光照，4月下旬开始闭瓶温室内炼苗，炼苗20天，然后打开瓶口2～3天，注意保湿，取出试管苗，洗净根部培养基，栽入盛有珍珠岩的育苗盘，扣上小拱棚保湿，并在每天上午10时到下午4时罩上遮阳网防强光直射，湿度保持在90%左右，温度30%左右，10天后，可适当通风降湿，随后撤去遮阳网和小拱棚，将枣苗栽入泥炭土和田园土1∶1的混合土中，1个月后可入大田。采用这种方法移栽试管苗成活率可达90%以上。
3 小结
本项研究成功地解决了脱毒鸡心枣组织培养工厂化快速育苗的技术与方法。按每次成功培养脱毒苗40株，从7月份到翌年3月份共继代增殖9次，到秋末繁育脱毒鸡心枣苗木数量为40×57×90%=280万棵。采用这种方法可以快速进行繁育脱毒枣苗，以满足生产需要，提高枣树产量和品质。
1 材料与方法
选用河南省新郑枣科所特优品种鸡心枣为试材，一年生根蘖苗定植于温室内，第二年2～4月份取其萌发的枣头芽，用稀释的洗洁精浸泡15分钟，再以自来水冲净后，置于超净工作台上，用70%的酒精消毒45秒，无菌水冲洗一遍，再用0.1%升汞消毒7分钟，无菌水冲洗4～5遍，在体视境下一一剥去叶片至0.5～0.1cm时接种于培养基上，接种后置于光强2500lx，温度27～29℃培养室内培养，光照时间14小时/天。诱导出的试管苗在38℃光照培养箱内热处理60天，热将处理的试管苗在无菌条件下剥取0.1～0.3mm的茎尖，在启动培养基中培养出试管苗，把茎尖试管苗送到中国林业科学院森保所病鉴室，经病毒检测完全脱除枣疯病，然后进行组织培养快速繁殖，夏、秋、冬季进行培养室内组培快繁，翌年3月上旬开始生根，4月份开始室外温室大棚内炼苗、移栽，6月份实施营养钵栽培或大田栽培。为降低成本，配置培养基时用白砂糖代替蔗糖，用自来水代替去离子水。
2 结果与讨论
2.1 启动培养基 选用同一种培养基与四种激素组合：（1）MS＋6～BA3.0mg/L＋NAA0.1mg/L；（2）MS＋6～BA5.0mg/L＋NAA0.3mg/L；（3）MS＋6～BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L；（4）MS＋6～BA1.0mg/L＋NAA0.5mg/L。结果表明，第三种配方最佳，接种到这种培养基上的外植体，3周后开始生长、分化并长成一棵苗，40天后可以切段增殖培养。
2.2 热处理微茎尖脱毒 经初代培养的试管苗在培养箱内温度从30℃逐渐升高到38℃，开始计时，热处理60天，中间换一次培养基。茎尖培养苗经PCR扩增方法检测脱除枣疯病类菌质体。
2.3 继代增殖培养基 选用三种激素组合：（1）MS＋6～BA1.0mg/L＋IBA0.5mg/L；（2）MS＋6BA1.5mg/L＋IBA0.5mg/L；（3）MS＋6～BA2.0mg/L＋IBA0.5mg/L。结果表明，第二种培养基及激素组合最佳，转接带叶茎段1.5cm长，1个月可增殖4.5倍左右，幼苗生长健壮。
2.4 生根试验 共用四种组合：（1）1/2MS＋IBA0.3mg/L＋NAA0.3mg/L；（2）1/2MS＋IBA0.5；（3）1/2MS＋IBA1.0mg/L＋NAA0.3mg/L；（4）1/2MS＋IBA1.5mg/L＋NAA0.5mg/L。结果表明，第四种培养基发根早，生根率达到100%，每株根数3条以上，平生根长2cm以上。
2.5 试管苗驯化移栽 枣树苗喜欢高温强光照，4月下旬开始闭瓶温室内炼苗，炼苗20天，然后打开瓶口2～3天，注意保湿，取出试管苗，洗净根部培养基，栽入盛有珍珠岩的育苗盘，扣上小拱棚保湿，并在每天上午10时到下午4时罩上遮阳网防强光直射，湿度保持在90%左右，温度30%左右，10天后，可适当通风降湿，随后撤去遮阳网和小拱棚，将枣苗栽入泥炭土和田园土1∶1的混合土中，1个月后可入大田。采用这种方法移栽试管苗成活率可达90%以上。
3 小结
本项研究成功地解决了脱毒鸡心枣组织培养工厂化快速育苗的技术与方法。按每次成功培养脱毒苗40株，从7月份到翌年3月份共继代增殖9次，到秋末繁育脱毒鸡心枣苗木数量为40×57×90%=280万棵。采用这种方法可以快速进行繁育脱毒枣苗，以满足生产需要，提高枣树产量和品质。
