一、液态精液稀释配方与配制 1.精液低倍稀释的稀释液,在精液采出后,原精数量不够时, 可作低倍稀释,密度仪器测定。满足需要,并在短时间内使用,稀释液配方可简单些。如生理盐水;奶类稀释液:用鲜牛、羊奶,水浴92℃~95℃消毒15分钟, 冷却 奶皮后即可使用。凡用于高倍稀释精液的稀释液,都可作低倍稀释用。 2.精液高倍稀释的稀释液,不但是为了扩大精液量, 而要延长精子的保存时间,配方很多,现介绍2个稀释液。 (1)葡萄糖3克,柠蒙酸钠1.4克,EDTA(乙二胺四乙酸二钠)0.4克, 加蒸馏水至100毫升,溶解后水浴煮沸消毒20分钟,冷却后加青霉素10万单位,链霉素0.1克,若再加10~20毫升卵黄,可延长精子存活时间。 (2)葡萄糖5.2克、乳糖2.0克、柠檬酸钠0.3克,EDTA0.07克,三墓0. 05克,蒸馏水100毫升,溶解后煮沸消毒20分钟,冷却后加庞庆大霉素1万单位,卵黄5毫升。
二、液态精液稀释 原精液活率在0.6以上万可用于稀释输精。 1.精液低倍稀释,原精液量够输精时,可不必再稀释, 可以直接用原精直接输精。不够时按需要量作1∶2~4倍稀释,要把稀释液加温到30℃,再把它缓慢加到原精液中,摇匀后即可使用。 2.精液高倍稀释,要以精子数、输精剂量、每一剂量中含有1000 万个前进运动精子数,结合下午最后输精时间的精子活率,来计算出精液稀释比例,在30℃下稀释(方法同前)。
三、分装、保存和运输 精液低倍稀释,就近输精,把它放在小瓶内,不需降温保存, 短时间用毕。 1.分装保存 (1)小瓶中保存;把高倍稀释清液,按需要量( 数个输精剂量装入小瓶,盖好盖,用蜡封口,包裹纱布,套上塑料袋,放在装有冰块的保温瓶(或保存箱)中保存,保存温度为0℃~5℃。 (2)塑料管中保存:作者等把精液以1∶40倍稀释,以0.5毫升为一个输精剂量,注入饮料塑料吸管内(剪成20厘米长,紫外线消毒), 两端用塑料封口机封口,保存在自制的泡沫塑料的保存箱内( 底放冻好的冰袋,再放泡沫塑料隔板,把精液管用纱布包好,放在隔板上面,固定好)盖上盖子,保存温度大多在4℃~7℃,最高到9℃。精液保存10小时内使用,这种方法,可不用输精器了,经济实用。 2.运输 不论那种包装,精液必须固定好,尽可能减轻振动。若用摩托车送精液,要把精液箱(或保温瓶)放在背包中,背在身上。若乘汽车送精液, 最好把它抱在身上。
四、冷冻精液制作技术 制作冷冻精液,要有很多设备,好在各省、区都有精液冷冻站, 可用它来兼冻波尔山羊精液,不需增加设备, 有的站已经开始冷冻波尔山羊精液,并取得较好的效果。作者等研究成功的80 年代在北京市门头沟区冷冻绒山羊精液,获得情期受胎率73%的好结果,现介绍给大家,供参考。 1.稀释液配方与配制 Ⅰ液 葡萄糖3克、柠檬酸钠3克,加蒸馏水至100毫升,溶解后,水浴煮沸消毒20分钟,冷却后加青霉素10万单位,链霉素0.1克,取80毫升加卵黄20毫升。 Ⅱ液 取Ⅰ液44毫升,加甘油6毫升。 2.精液冷冻制作 采出的精液,检查活率在0.6以上者即可冷冻,在30℃下用Ⅰ液(30℃)进行1∶1.5倍稀释,包上8层纱布放在4℃冰箱中预冷降温2~小时,在4 ℃下加与Ⅰ液等量的含甘油的Ⅱ液,摇匀,最终稀释比例为1∶3倍稀释,立即在氟板上滴冻成0.1毫升的颗粒。取本稀释液Ⅰ液94毫升,加甘油6毫升, 合成一液,就可以冷冻细管精液。
五、母羊发情鉴定 1.以母羊发情外部表现来判断母羊发情 本地母山羊发情外部表现较明显,发情时发出叫声,食欲减退, 兴奋不安,对外界刺激反应敏感,摇头摆尾,有交配欲,喜欢接近公羊, 在公羊追赶爬跨时常站立不动,让公羊交配;阴门肿大,流出粘液。 从母羊发情的外部表现来判断母羊是否发情是比较容易的。但养羊户往往不注意, 就不能确知母羊的发情开始时间,给适时输精造成困难。 2.试精 用试精公羊试情,能准确找出发情母羊,做到适时输精。 最简便的方法是,在试情前将公羊腹部带兜上试情布(长40~45厘米,宽35~40厘米,四角缝上25~30厘米长的带子),每日早晨一次或早晚各一次将公羊放入母羊群中试情。当母羊接受公羊爬跨,站立不动,或母羊围着公羊旋转,并不断摇尾,都是母羊发情的表现,及时把它抓出,待配。 3.试情公羊选择和饲养管理 试情公羊必须选择体质结实、健康无病,性欲旺盛,动作灵敏的1~5 岁公羊。试情公羊与母羊的比例以1∶30~40为宜。在配种前一个月驱虫,加强饲养管理,除放牧采食或舍饲喂草外,每天补饲0.2~0.3公斤混合精料。 每隔10~15天,给试情公羊排精一次,增强性欲。
六、输精 1.输精时间 适时输精,对提高母羊的受胎率十分重要。山羊的发情持续时间为24 ~48小时。排卵时间一般多在发情后期30~40小时。因此, 比较适宜的输精时间应在发情中期后(即发情后12~16小时)。 如以母羊外部表现来确定母羊发情的,若上午开始发情的母羊,下午与次日上午各输精1次;下午和傍晚开始发情的母羊,在次日上下午各输精1次。每天早晨1次试情的, 可在上下午各输精1次。2次输精间隔8~10小时为好,至少不低于6小时。若每天早晚各1次试情的,其输精时间与以母羊外部表现来确定母羊发情相同。 如母羊继续发情,可再行输精1次。 2.母羊保定 本文介绍一种不需输精架的倒立保定法,它没有场地限制, 任何地方都可输精。保定人将母羊头夹紧在两腿之间,两手抓住母羊后腿, 将其提到腹部,保定好不让羊动,母羊成倒立状。用温布把母羊外阴部擦干净, 即待输精。 3.输精方法 (1)子宫颈口内输精:将经消毒后在1%氯化钠溶液浸涮过的开膣器装上照明灯(可自制),轻缓地插入阴道,打开阴道,找到子宫颈口, 将吸有精液的输精器通过开膣器插入子宫颈口内,深度约1厘米左右。稍退开膣器,输入精液,先把输精器退出,后退出开膣器。进行下只羊输精时, 把开膣器放在清水中,用布洗去粘在上面的阴道粘液和污物,擦干后再在1% 氯化钠溶液浸涮过;用生理盐水棉球或稀释液棉球,将输精器上粘的粘液, 污物自口向后擦去。 (2)阴输精:将装有精液的塑料管从保存箱中取出( 需多少支取多少支,余下精液仍盖好),放在室温中升温2~3分钟后,将管子的一端封口剪开,挤1小滴镜检活率合格后,将剪开的一端从母羊阴门向阴道深部缓慢插入,到有阻力时停止,再剪去上端封口,精液自然流入阴道底部,拔出管子, 把母羊轻轻放下,输精完毕,再进行下只母羊输精。 装在小瓶中保存的高倍稀释精液,要用输精器吸入后再输精(余下精液仍在0~5℃下保存), 可作子宫颈口内或阴道输精。 液态精液情期受胎率方,80%以上。有人做过试验,阴道输精的情期受胎率比子宫颈口内输精的降低不到2%。所以说情期液态精液可以阴道输精,而且塑料管又可代替输精器, 便于推广应用。冷冻精液必须进行子宫颈口内输精,否则会降低受胎率。 有条件用腹腔镜子宫角内输精,能使冷冻精液受胎率提高。 4.输精量 原精输精每只羊每次输精0.05~0.1毫升,低倍稀释为0.1~0.2毫升,高倍稀释为0.2~0.5毫升,冷冻精液为0.2毫升以上。 5.冷冻精液解冻 解冻好坏对解冻后活率有很大影响。本人采用40 ℃水温解冻颗粒精液,先把小试管用维生素B12(每支含0.5毫克)冲洗一下,留一点B12,并快速在40℃水中摇动至2/3融化,取出试管继续速摇至全部融,解冻后活率较好,可试试。 另外,建议做一个泡沫塑料小盒,倒上液氮, 再把冷冻精液袋放入氮液中,这样可避免未解冻的颗粒精液,因升温又入液氮降温,影响活率。
七、所需器材、药品、用品、表格 1.所需器材、药品、用品 所需物品大部分已在文章中提到了。用于配制稀释液的药品、 试剂:如葡萄糖要一水的、柠檬酸钠、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)都要分析纯的, 青、链霉素不要过期的,卵黄需新鲜鸡蛋,要用不加水的鲜奶。假阴道内胎, 玻璃器皿易破损的物品要多准备一些。显微镜保温箱、开膣器照明灯、 精液保存箱等能自己做的尽可能自己做,在实践中要有所创新。 如要开展冷冻精液输精,要配备好液氮罐。 2.表格 有种公羊精液品质检查表;母羊配种记录表;精液使用登记表, 及日常事务记录等,各项记录必须按时、准确填写。是为了统计分析, 总结经验,改进工作。 十一、建立人工授精站和输精点 地处平川的, 可象江苏省海门市那样全市就改良站制作高倍稀释精液,负责统一供精,每个镇兽医站设一个输精点,负责农户母羊输精。 地处山区的,可划片建立人工授精站,全县可建2~3个人工授精站, 在乡镇或母羊多的村设输精点。若采用冷冻精液输精,县里又无精液冷冻设备, 人工授精站可统一购买冷冻精液,转给各乡镇输精点,每点配备液氮罐, 由人工授精站定期到各输精点添加液氮。有条件地地方也可购置冷冻精液设备, 饲养波尔山羊公羊,自己制作冷冻精液,也是可以的。但不能提倡, 因为我国现有冷冻精液设备,已够用的了。还可在配种季节,季节性的集中母羊, 建立短期的人工授精站,采用鲜精或低倍稀释精液输精,到配种季节末结束。 各地可根据具体情况,采用、创新。 1.建立人工授精站的条件和基本建设 人工授精站应建立在背风、向阳、干燥、有水源、 牧草地面积大或有较多的农田,无疾病流行史,交通便,母羊数量多,又是一县的中心地带, 这样便于每天送或取精液,因为高倍稀释精液,当天精液只能当天使用, 第二天使用就要降低受胎率,就得天天取送精液,设在边远地区就不方便了。 人工授精站设有:采精室(兼作输精室)、精液处理室(要有顶棚)、 公羊圈舍、母羊圈、饲料间、兽医室、工作人员宿舍等。 2.建立输精点的条件 设在母羊较集中,交通较方便的地方,把点设在乡、 镇兽医站也可以,不论是用摩托车还是乘公共汽车取或送精液,在上午10 时前精液必须到各输精点,这样单程不能超过2小时,山区最远点距人工授精站20~30公里,平川可远到50公里以外。各地可根据当地的具体条件来建点。
二、液态精液稀释 原精液活率在0.6以上万可用于稀释输精。 1.精液低倍稀释,原精液量够输精时,可不必再稀释, 可以直接用原精直接输精。不够时按需要量作1∶2~4倍稀释,要把稀释液加温到30℃,再把它缓慢加到原精液中,摇匀后即可使用。 2.精液高倍稀释,要以精子数、输精剂量、每一剂量中含有1000 万个前进运动精子数,结合下午最后输精时间的精子活率,来计算出精液稀释比例,在30℃下稀释(方法同前)。
三、分装、保存和运输 精液低倍稀释,就近输精,把它放在小瓶内,不需降温保存, 短时间用毕。 1.分装保存 (1)小瓶中保存;把高倍稀释清液,按需要量( 数个输精剂量装入小瓶,盖好盖,用蜡封口,包裹纱布,套上塑料袋,放在装有冰块的保温瓶(或保存箱)中保存,保存温度为0℃~5℃。 (2)塑料管中保存:作者等把精液以1∶40倍稀释,以0.5毫升为一个输精剂量,注入饮料塑料吸管内(剪成20厘米长,紫外线消毒), 两端用塑料封口机封口,保存在自制的泡沫塑料的保存箱内( 底放冻好的冰袋,再放泡沫塑料隔板,把精液管用纱布包好,放在隔板上面,固定好)盖上盖子,保存温度大多在4℃~7℃,最高到9℃。精液保存10小时内使用,这种方法,可不用输精器了,经济实用。 2.运输 不论那种包装,精液必须固定好,尽可能减轻振动。若用摩托车送精液,要把精液箱(或保温瓶)放在背包中,背在身上。若乘汽车送精液, 最好把它抱在身上。
四、冷冻精液制作技术 制作冷冻精液,要有很多设备,好在各省、区都有精液冷冻站, 可用它来兼冻波尔山羊精液,不需增加设备, 有的站已经开始冷冻波尔山羊精液,并取得较好的效果。作者等研究成功的80 年代在北京市门头沟区冷冻绒山羊精液,获得情期受胎率73%的好结果,现介绍给大家,供参考。 1.稀释液配方与配制 Ⅰ液 葡萄糖3克、柠檬酸钠3克,加蒸馏水至100毫升,溶解后,水浴煮沸消毒20分钟,冷却后加青霉素10万单位,链霉素0.1克,取80毫升加卵黄20毫升。 Ⅱ液 取Ⅰ液44毫升,加甘油6毫升。 2.精液冷冻制作 采出的精液,检查活率在0.6以上者即可冷冻,在30℃下用Ⅰ液(30℃)进行1∶1.5倍稀释,包上8层纱布放在4℃冰箱中预冷降温2~小时,在4 ℃下加与Ⅰ液等量的含甘油的Ⅱ液,摇匀,最终稀释比例为1∶3倍稀释,立即在氟板上滴冻成0.1毫升的颗粒。取本稀释液Ⅰ液94毫升,加甘油6毫升, 合成一液,就可以冷冻细管精液。
五、母羊发情鉴定 1.以母羊发情外部表现来判断母羊发情 本地母山羊发情外部表现较明显,发情时发出叫声,食欲减退, 兴奋不安,对外界刺激反应敏感,摇头摆尾,有交配欲,喜欢接近公羊, 在公羊追赶爬跨时常站立不动,让公羊交配;阴门肿大,流出粘液。 从母羊发情的外部表现来判断母羊是否发情是比较容易的。但养羊户往往不注意, 就不能确知母羊的发情开始时间,给适时输精造成困难。 2.试精 用试精公羊试情,能准确找出发情母羊,做到适时输精。 最简便的方法是,在试情前将公羊腹部带兜上试情布(长40~45厘米,宽35~40厘米,四角缝上25~30厘米长的带子),每日早晨一次或早晚各一次将公羊放入母羊群中试情。当母羊接受公羊爬跨,站立不动,或母羊围着公羊旋转,并不断摇尾,都是母羊发情的表现,及时把它抓出,待配。 3.试情公羊选择和饲养管理 试情公羊必须选择体质结实、健康无病,性欲旺盛,动作灵敏的1~5 岁公羊。试情公羊与母羊的比例以1∶30~40为宜。在配种前一个月驱虫,加强饲养管理,除放牧采食或舍饲喂草外,每天补饲0.2~0.3公斤混合精料。 每隔10~15天,给试情公羊排精一次,增强性欲。
六、输精 1.输精时间 适时输精,对提高母羊的受胎率十分重要。山羊的发情持续时间为24 ~48小时。排卵时间一般多在发情后期30~40小时。因此, 比较适宜的输精时间应在发情中期后(即发情后12~16小时)。 如以母羊外部表现来确定母羊发情的,若上午开始发情的母羊,下午与次日上午各输精1次;下午和傍晚开始发情的母羊,在次日上下午各输精1次。每天早晨1次试情的, 可在上下午各输精1次。2次输精间隔8~10小时为好,至少不低于6小时。若每天早晚各1次试情的,其输精时间与以母羊外部表现来确定母羊发情相同。 如母羊继续发情,可再行输精1次。 2.母羊保定 本文介绍一种不需输精架的倒立保定法,它没有场地限制, 任何地方都可输精。保定人将母羊头夹紧在两腿之间,两手抓住母羊后腿, 将其提到腹部,保定好不让羊动,母羊成倒立状。用温布把母羊外阴部擦干净, 即待输精。 3.输精方法 (1)子宫颈口内输精:将经消毒后在1%氯化钠溶液浸涮过的开膣器装上照明灯(可自制),轻缓地插入阴道,打开阴道,找到子宫颈口, 将吸有精液的输精器通过开膣器插入子宫颈口内,深度约1厘米左右。稍退开膣器,输入精液,先把输精器退出,后退出开膣器。进行下只羊输精时, 把开膣器放在清水中,用布洗去粘在上面的阴道粘液和污物,擦干后再在1% 氯化钠溶液浸涮过;用生理盐水棉球或稀释液棉球,将输精器上粘的粘液, 污物自口向后擦去。 (2)阴输精:将装有精液的塑料管从保存箱中取出( 需多少支取多少支,余下精液仍盖好),放在室温中升温2~3分钟后,将管子的一端封口剪开,挤1小滴镜检活率合格后,将剪开的一端从母羊阴门向阴道深部缓慢插入,到有阻力时停止,再剪去上端封口,精液自然流入阴道底部,拔出管子, 把母羊轻轻放下,输精完毕,再进行下只母羊输精。 装在小瓶中保存的高倍稀释精液,要用输精器吸入后再输精(余下精液仍在0~5℃下保存), 可作子宫颈口内或阴道输精。 液态精液情期受胎率方,80%以上。有人做过试验,阴道输精的情期受胎率比子宫颈口内输精的降低不到2%。所以说情期液态精液可以阴道输精,而且塑料管又可代替输精器, 便于推广应用。冷冻精液必须进行子宫颈口内输精,否则会降低受胎率。 有条件用腹腔镜子宫角内输精,能使冷冻精液受胎率提高。 4.输精量 原精输精每只羊每次输精0.05~0.1毫升,低倍稀释为0.1~0.2毫升,高倍稀释为0.2~0.5毫升,冷冻精液为0.2毫升以上。 5.冷冻精液解冻 解冻好坏对解冻后活率有很大影响。本人采用40 ℃水温解冻颗粒精液,先把小试管用维生素B12(每支含0.5毫克)冲洗一下,留一点B12,并快速在40℃水中摇动至2/3融化,取出试管继续速摇至全部融,解冻后活率较好,可试试。 另外,建议做一个泡沫塑料小盒,倒上液氮, 再把冷冻精液袋放入氮液中,这样可避免未解冻的颗粒精液,因升温又入液氮降温,影响活率。
七、所需器材、药品、用品、表格 1.所需器材、药品、用品 所需物品大部分已在文章中提到了。用于配制稀释液的药品、 试剂:如葡萄糖要一水的、柠檬酸钠、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)都要分析纯的, 青、链霉素不要过期的,卵黄需新鲜鸡蛋,要用不加水的鲜奶。假阴道内胎, 玻璃器皿易破损的物品要多准备一些。显微镜保温箱、开膣器照明灯、 精液保存箱等能自己做的尽可能自己做,在实践中要有所创新。 如要开展冷冻精液输精,要配备好液氮罐。 2.表格 有种公羊精液品质检查表;母羊配种记录表;精液使用登记表, 及日常事务记录等,各项记录必须按时、准确填写。是为了统计分析, 总结经验,改进工作。 十一、建立人工授精站和输精点 地处平川的, 可象江苏省海门市那样全市就改良站制作高倍稀释精液,负责统一供精,每个镇兽医站设一个输精点,负责农户母羊输精。 地处山区的,可划片建立人工授精站,全县可建2~3个人工授精站, 在乡镇或母羊多的村设输精点。若采用冷冻精液输精,县里又无精液冷冻设备, 人工授精站可统一购买冷冻精液,转给各乡镇输精点,每点配备液氮罐, 由人工授精站定期到各输精点添加液氮。有条件地地方也可购置冷冻精液设备, 饲养波尔山羊公羊,自己制作冷冻精液,也是可以的。但不能提倡, 因为我国现有冷冻精液设备,已够用的了。还可在配种季节,季节性的集中母羊, 建立短期的人工授精站,采用鲜精或低倍稀释精液输精,到配种季节末结束。 各地可根据具体情况,采用、创新。 1.建立人工授精站的条件和基本建设 人工授精站应建立在背风、向阳、干燥、有水源、 牧草地面积大或有较多的农田,无疾病流行史,交通便,母羊数量多,又是一县的中心地带, 这样便于每天送或取精液,因为高倍稀释精液,当天精液只能当天使用, 第二天使用就要降低受胎率,就得天天取送精液,设在边远地区就不方便了。 人工授精站设有:采精室(兼作输精室)、精液处理室(要有顶棚)、 公羊圈舍、母羊圈、饲料间、兽医室、工作人员宿舍等。 2.建立输精点的条件 设在母羊较集中,交通较方便的地方,把点设在乡、 镇兽医站也可以,不论是用摩托车还是乘公共汽车取或送精液,在上午10 时前精液必须到各输精点,这样单程不能超过2小时,山区最远点距人工授精站20~30公里,平川可远到50公里以外。各地可根据当地的具体条件来建点。